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NGS科研用建库试剂盒
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K02420-S/L   Balancer NGS Library Preparation Kit for small/microRNA – Illumina Compatible

流程介绍
small/microRNA文库制备试剂盒能有效去除引物二聚体,并在同样数据量中获得更多种类的小RNA。具有单一试管反应、一天工作流程的特点。整个流程从总RNA开始,经过接头连接、反转录、PCR和切胶回收的过程,可构建适合Illumina测序仪的small/microRNA文库。通过优化实验流程,有效减少了接头的二聚体,可以从最少10ng 总RNA中成功完成文库构建,同时有效降低了连接反应的偏好性(bias),使得客户能够在同样的测序深度来发现更多的小RNA和microRNA,产生更好的科研发现。该产品可被广泛应用于分析各类临床样品(如FFPE样品和血清/血浆样本)的总RNA。

流程图


流程优势
• 更多地发现——有效去除连接偏好性(bias);
• 更优的数据质量——显著去除接头二聚体;
• 优化的实验流程——单管一天实验流程。
• 以总RNA作为起始反应物——无须进一步的纯化;
• 10ng总RNA便可进行;
• 可应用于血清和FFPE样品;
• 适合自动化操作。

常见问题解答
1. 你们是否处理过血清样本,对于血清样本你们是否有什么建议?需要多少血清能够提取出足够建库的total RNA?
我们处理过大量血清样本,有优化过的total RNA纯化的流程。通常0.5-1ml血清就可以得到建库足够的total RNA。当然,这也和血清样本的保存状况有关。

2. 在实验过程中比较重要的步骤是哪几个步骤?
只要样本中存在小RNA,按照我们的protocol操作一般是不会出现问题的。需要注意的只有一点:我们建议大家在建库时做一个不加样本的负对照,这样可以清晰的观察到小RNA的条带电泳的位置,并和可能产生的引物二聚体区分,这样不会错误回收引物二聚体片段。胶尽量跑远,割胶前后都要照相。不只一条条带时分别切胶回收等也都是减少无用数据的方法。

3. 在高通量测序中,small RNA 文库构建是从total RNA起始的吗?一般 total RNA 需要的量是多少?最低起始量是多少?
small RNA 文库构建是从total RNA起始的。在建库中,一般total RNA的用量是1ug,最低起始量是10ng。small RNA 建库的关键之处是提取的RNA中是否有small RNA,及含有的small RNA 的多少。不同物种不同样品提取的small RNA的含量都不同,一般情况下,样品起始量为1ug total RNA,PCR进行12个循环。

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